Приложение 2. Технология инструментального осеменения пчелиных маток

Осеменение маток проводят в лаборатории при температуре воздуха не ниже 25° С.

Для работы требуются термостат, станок для осеменения маток, микроскоп биологический стереоскопический, баллон с углекислым газом, редуктор, двугорлая колба Тищенко, садки, кислородная подушка, резиновые соединительные шланги, пинцеты, бюксы, физиологический раствор, вата, марля, дистиллированная вода.

Станок для инструментального осеменения маток состоит из подставки с двумя поддерживающимися стойками, на которых крепятся блоки вентрального и жального крючков и блок шприца. Блоки крепятся подвижно, обеспечивая свободное движение крючков и шприца. Крючками раскрывают камеру жала матки, а шприцем производят отбор и вспрыскивание спермы в половые пути матки. Матка перед этим фиксируется в маткодержателе блока, расположенного сбоку подставки. К маткодержателю с нижней стороны подведен газовый шланг.

Шприц состоит из трубки с нарезкой на обоих концах, в которую ввинчивается металлический поршень, переходящий в легко подвижный тастер. Конец тастера соприкасается с резиновой мембраной, вставленной в соединительную муфту. Свободное пространство заполняется физиологическим раствором (0,9% NaCl), а затем ввинчивается наконечник шприца. Физиологический раствор действует как жидкий поршень.

В связи с тем, что наконечник шприца очень хрупкий и часто ломается, к нему заранее готовят капилляры. Их можно изготовить вручную из стеклянных трубочек диаметром 3—5 мм. На газовой горелке трубки нагревают и вытягивают до меньшего диаметра (0,8—1,2 мм). Затем над пламенем спиртовки один конец капилляра вытягивают до 0,25—0,3 мм. Этот конец шлифуют наждачной бумагой (нулевкой) и оплавляют в пламени спиртовки. Важно, чтобы капилляр был без малейших шероховатостей. Подготовленный капилляр приклеивают к наконечнику менделеевской замазкой или сургучом.

Капилляры дезинфицируют кипячением, крючки, пинцеты, стеклянные капилляры дезинфицируют спиртом 76° с добавлением 0,1% йода.

Техника осеменения маток. Маток осеменяют в возрасте 6—13 дней (сроки их естественного спаривания). Трутней залавливают в садок во время их лета, а в плохую погоду берут с крайних сотов гнезда. В лаборатории, если трутни до этого не летали, их выпускают из садка для очистительного облета.

Перед началом работы заполняют втулку шприца физиологическим раствором и ввинчивают наконечник до полного примыкания к резиновой мембране. Перед отбором спермы в наконечник втягивают небольшой пузырек воздуха, который отделит жидкость от набираемой спермы.

Чтобы вызвать выворачивание эндофаллуса и эякуляцию у трутня, его берут за голову и грудь с вентральной стороны пальцами левой руки. Затем спинную часть брюшка слегка сдавливают пальцами правой руки. Это вызывает сокращение брюшных мышц и частичное или полное выворачивание полового органа и эякуляцию.

Если происходит частичное выворачивание эндофаллуса, брюшко сжимают от передней части к задней, пока не появится сперма. Вначале выделяется сперма кремового цвета, а затем белый мукус.

Затем поверхность спермы приводят в контакт с кончиком шприца, которая входит в него по мере оттягивания поршня. Следует избегать засасывания мукуса, так как он быстро свертывается, образуя пробку. Когда подносят следующего трутня, из наконечника предварительно спускают капельку спермы предыдущего, чтобы она соединилась с новой порцией спермы, а затем все втягивают в шприц. Средний объем спермы от одного трутня 1 мм³. Для заполнения наконечника отбирают сперму от 4—6 трутней одной семьи. Отбор спермы проводят под микроскопом при увеличении в 8 раз. Чтобы сперма не высыхала, столбик ее поднимают и забираю, каплю физиологического раствора.

Перед осеменением матку выпускают на окно для очистительного облета, затем ее заключают вниз головой в маткодержатель, из которого должны выступать три последних брюшных сегмента, и анестезируют углекислым газом. Газ поступает из баллона через редуктор, сосуд с водой и шланг, соединенный с маткодержателем. Сосуд с водой необходим для контроля за скоростью течения углекислого газа.

После усыпления матки маткодержатель фиксируют в блоке. Крючками раскрывают камеру жала, а шприц со спермой вводят в половые пути матки под микроскопом при увеличении в 16 раз. Наконечник шприца вводят во влагалище легким движением вперед-назад, чтобы отвести клапан, препятствующий его прохождению в непарный яйцевод. Шприц вводят на 1,5 мм и осторожно впрыскивают сперму. Матку вынимают из маткодержателя и, пока она в неподвижном состоянии, метят. Затем ее помещают в клеточку и возвращают в семью-воспитательницу. На осеменение одной матки затрачивают в среднем 15 мин.

Через 24—36 ч проводят повторное осеменение. При каждом осеменении расходуют 4 мм³ семени.

После осеменения трех маток промывают и дезинфицируют капилляр. Крючки и пинцеты дезинфицируют после каждой осемененной матки. После окончания работы дезинфицируют все инструменты.

Осемененных маток держат в семье-воспитательнице в течение 5—7 дней, в результате чего у них пропадает стремление к вылетам из улья.

Благодаря содержанию осемененных маток в семьях-воспитательницах более 90 % из них нормально откладывают оплодотворенные яйца. По продолжительности жизни такие матки не отличаются от естественно спарившихся.