ЛАБОРАТОРНЫЕ ЗАНЯТИЯ

Определение вида микробов. 1. Произвести посевы на питательные среды и изучить их физико-химические изменения, происходящие под влиянием бактерий. 2. Определить вид бактерий.

Оборудование и материалы: учащимся предоставляют штативы со средами, засеянными на предыдущем практическом занятии, предметные стекла, кедровое масло, набор красящих растворов, спиртовки, реактив Эрлиха, эфир.

Изучение влияния бактерий на питательные среды. Каждая питательная среда имеет свое назначение и определенным образом изменяется под влиянием микроба.

МПА позволяет изучать характер роста, судить о его чистоте и в случае надобности длительно сохранять культуру. О чистоте культуры судят по однотипности цвета среды, структуре и форме роста по всей поверхности агара, по отсутствию каких-либо других колоний.

МП Б позволяет устанавливать: а) наличие или отсутствие на поверхности пленки, состоящей из микробных тел; пленка указывает на потребность микроорганизмов в кислороде (облигатные, или обязательные, аэробы; микробы — факультативные анаэробы, безразлично относящиеся к кислороду, не образуют пленки); б) помутнение бульона. Помутнение создают обычно подвижные микробы, иногда оно вызывается и неподвижными бактериям: (например, стафилококки); в) образование на дне различных осадков: зернистых, хлопьевидных, крошковатых, слизистых.

МПЖ необходима для определения у микроорганизма протеолитического фермента протеазы. Наличие протеолиза выражается в разжижении желатины, которая представляет собой плотную среду, охлаждаемую столбиком. Посев в нее производят в центр столбика почти до дна. Для того чтобы иметь возможность изучить характер роста на желатине, посевы ставят при комнатной температуре и не выше 21 °С. При таких условиях на желатине изучают также отношение микроба к кислороду. Аэроб будет расти только на поверхности, анаэроб — внизу, а факультативный — по всему уколу.

Для более быстрой диагностики засеянную МПЖ ставят в термостат вместе с другими пробирками, что дает возможность учитывать результаты роста быстрее. В этом случае отмечают дашь наличие или отсутствие разжижения желатины.

При этом способе выращивания микроорганизмов учет изменений в желатине проводят после охлаждения пробирок под краном с холодной водой. Определение разжижения желатины проводят наклонением пробирки или ее осторожным переворачиванием. Если остывшая желатина растекается по стенке пробирки, то такие изменения отмечают как разжижение.

По молоку определяют наличие или отсутствие ферментоз на белок — казеин и углевод — лактозу. Учет проводят по свертыванию молока и его пептонизации. Под влиянием фермента лактозы молочный сахар (лактоза) расщепляется до образования кислотных продуктов. В результате казеин свертывается и выпадает в виде сгустка, а отстоявшаяся сыворотка делается прозрачной. Пептонизация выражается в просветлении сгустка молока. Ферментативному распаду подвергается казеин, расщепляемый ферментом казеазой. В случае пептонизации молоко или его сгусток из гомогенной белой жидкости делается прозрачным.

Картофель предназначается для изучения пигментообразования. Пигментные микробы образуют пигмент на картофеле раньше и интенсивнее, чем на агаре. Этому способствует химический состав картофеля, в частности присутствие в нем солей магния.

Определение сероводорода. Образование сероводорода свидетельствует о распаде белка. Для обнаружения сероводорода производят посев на МПБ, причем между пробкой и стенкой пробирки укрепляют реактивную бумажку. Посевы ставят в термостат. Через 1—2 сут роста бумажка чернеет в том случае, если микроорганизмы образуют сероводород при разложении белка.

Приготовление реактивных бумажек. Листок фильтровальной бумаги смачивают насыщенным водным раствором уксуснокислого свинца, высушивают и нарезают узкими полосками в длину пробирки. Хранят в банках с притертыми пробками.

Определение индола. Индолообразование свидетельствует о глубоком распаде белка. В засеянную пробирку с МПБ после 2—3-дневного выращивания наливают 1—2 мл эфира, пробирку встряхивают в течение 3—5 мин в целях экстракции индола в эфир. Затем по стенке пробирки осторожно добавляют несколько капель реактива Эрлиха. Этот реактив располагается в виде диска между бульоном и эфиром. При наличии индола реактив приобретает малиново-красный цвет. При отсутствии индола цвет жидкости остается без изменения. Состав реактива Эрлиха: парадиметиламидобензальдегид — 1 мл, 96%-ный спирт — 95 мл, соляная кислота — 20 мл.

Наличие у микроорганизмов ферментов на углеводы определяют по цветным средам. Микроорганизмы, имеющие фермент на углевод, содержащийся в цветной среде, вызывает яркое окрашивание среды (отсюда название цветные среды).

Газообразование на глюкозе определяют на среде нейтральрот — агар Ротбергера. При наличии газообразования столбик среды разрывается и часто обесцвечивается.

Определение вида бактерий. Сведения, получаемые при выделении чистой культуры и ее изучении, отмечают в журналах, в том числе отмечают порядковый номер выделенной культуры, дату выделения, название патологического материала, из которого получена культура, а также все морфологические и физиологические свойства микроорганизма.

Собранные о микроорганизме сведения сравнивают с морфологическими и физиологическими свойствами энтомопатогенных бактерий — возбудителей инфекционных болезней пчел. Другие бактерии можно определить по определителю (см. «Микрофлора насекомых.» Новосибирск, Наука, 1969).

Для определения патогенности микроорганизмов проводят опытные заражения.

Изучение микрофлоры внешней среды. Большое практическое значение имеет определение количества микроорганизмов в каком-либо объеме. Так, принято определять количество микроорганизмов в воде, меде, перге в объеме 1 мл. Существует два метода определения количества микроорганизмов: непосредственный, когда в камере Горяева подсчитывают количество микроорганизмов под микроскопом, и посредством серийных разведений с последующим высевом на чашки Петри с мясопептонным агаром, выращиванием в термостате и подсчетом колоний. В дальнейшем проводят пересчеты на 1 мл. Второй метод позволяет определять только живые микроорганизмы, растущие на мясопептонном агаре.