ВЬЕХЕТ Л. - (ЧЕХОСЛОВАКИЯ) - ВЛИЯНИЕ ПРОПОЛИСА НА РЯД ВИДОВ МИКРООРГАНИЗМОВ И ПЛЕСЕНЕЙ

В настоящее время уделяется большое внимание изучению использования прополиса, не только в сельском хозяйстве, но и в химии и медицине. Меня прополис заинтересовал не только как пчеловода, но и как миколога, так как я работаю в промышленности антибиотиков. Здесь, я приведу только ориентировочную, первую часть нашего большого исследования, которое безусловно имеет и недостатки.

Прополис - натуральный пчелиный продукт, который - цитируем из "Дер Имкерфрейнд" - содержит около 55% смол и клейких веществ, 10% летучих масел, 30% воска и 5% пыльцы. На холоде прополис представляет собой твердое и хрупкое вещество, в тепле он становится мягким, пластичным и очень клейким (прилипающим). Как утверждает БРЕННЕР, цвет его каштановый или красноватый до зеленого. На бактерицидное свойство прополиса - по ШМИДУ - большое влияние оказывает источник, из которого он происходит. ВИЛЬЯНУЭВА и сотр. указывают, что самая активная составная часть прополиса представлена галантином, соответственно 3, 5, 7-тригидроксифлавоном. Кроме того, еще в 1972 г. были известны - по ЛАВИ - флавоны хризин и тектохризин. Эти флавоны содержатся всегда в клеях тополевых почек. Поэтому будет правильным предположить, что прополис происходит из почек деревьев.

Методика опыта

Цель опыта заключалась в оценке бактерицидного действия прополиса на некоторые виды микробов, плесеней и дрожжей. По системе Бергея для классификации бактерий мы определили следующие виды: из отряда Eubacteriales: Escherichia coli 9637/37, Micrococcus flavus ATCC 10 240, Micrococcus lysodeicticus ATCC 4698, Staphylococcus aureus P-1485, Sarcina lutea ATCC S 314, Streptococcus cremoris NIRD 185, Corynebacterium equi BU CSAV 184, Bacillus licheniformis, Bacillus subtilis BL 750 2 g, Bacillus antracoides.

из подтипа Eumycophyta: Fusarium solani 257, Aspergillus ochraceus 511;

из дрожжей семейства Endomycetaceae (Saccharomycetaceae): Saccharomyces cerevisiae ATCC 2611;

из семейства Cryptococcaceae:

Kloeckera apiculata BU CSAV и Candida albicans.

Работа проводилась в три этапа:

На первом этапе изучалось общее влияние прополиса на тестированные виды бактерий, плесеней и дрожжей.

На втором этапе опыта уточнялось бактерицидное действие прополиса.

На третьем этапе определялась эффективность прополиса по сравнению с антибиотическим действием пеницилина и фунгицидина.

Прополис, использованный в опыте, происходил как из северного пригорода Праги так и с Жизерских гор. В качестве растворителя использовали 96%-ный этиловый спирт. Соотношение между прополисом и этиловым спиртом было всегда 1:3, так как такая пропорция обеспечивает быстрое растворение и предотвращает насыщение раствора. Прополис с этиловым спиртом налили затем в колбу Эрленмейера на 300 мл и закрыли пластмассовой пробкой; колбу поместили в мешалку, где жидкость перемешивалась при температуре 31°Ц в течение 36 часов, в темноте. Затем содержимое колбы профильтрировали через бумажный фильтр для удаления механических частиц и нерастворившегося прополиса. Раствор прополиса в этиловом спирте хранили в темноте при 12°Ц. Для обеспечения гомогенности проб, на каждом этапе исследования всегда готовили только одну дозу прополиса, растворенного в этиловом спирте.

В качестве первоначального бактериологического материала использовали микробы, лиофилизированные на лошадиной сыворотке, а в качестве первоначальной культурной жидкой среды - бульон глюкозы. Бактерии культивировали 24 часа при температуре 37°Ц, плесени - 10 дней при 31°Ц, дрожжи - 48-72 часа паи 25°Ц. В бульоне культуру держали на холоде и всепда использовали лишь в течение нескольких дней. Для последующего хранения культуру высевали на наклонном эн-доагаре, культивировали некоторое время и затем хранили при - 5°Ц. Из законсервированной таким образом культуры можно брать микроорганизмы и снова высевать на глкжозном бульоне. Для опытов использовали твердые среды, в большинстве случаев агар-кровь. Для определения относительной эффективности по сравнению с антибиотиками применяли эндоагар. Для плесеней применяли среды Сабуро.

Бумажные фильтры и другое оборудование стерилизовали в стерилизаторе теплым воздухом при 160°Ц в течение трех часов.

Результаты опытов

Часть I

Для определения чувствительности микроорганизма к прополису использовали бумажный фильтр размером 205 мм и кружки диаметром 10 мм. Бумажный фильтр и кружки увлажнили раствором прополиса в этиловом спирте, но так, чтобы раствор не стекал на твердую среду. Одновременно с чувствительностью к прополису определяли и чувствительность разных видов микроорганизмов к этиловому спирту. Результат оказался отрицательным.

Примечание: + + + максимальная чувствительность; + + средняя чувствительность; + минимальная чувствительность

Часть II

Большинство микроорганизмов первой части опыта были использованы и во второй части, в которой установили точно бактерицидный эффект прополиса. Эффективность прополиса определяли при помощи метода Хитлея, с использованием остальных роликов диаметром 7,5 мм и установлением ингабирующих вон.

Результаты приводим в таблице 2.

Определение концентрации прополиса в этиловом спирте произвели на Bacillus subtilis, Sarcina lutea и Staphylococcus aureus. Результаты можно видеть в таблице 3.

Для определения возможной диффузии прополиса разведенного в этиловом спирте, после добавления воды, провели опыты с Saccharomyces cerevisiae, Staphylococcus aureus, Corynebacterium equi и Sarcina lutea.

К 9 мл раствора прополиса в этиловом спирте (отношение 1:3) добавили 1 мл дистиллированной воды. Результаты приведены в таблице 4.

Для определения термостабильности прополиса провели опыты при помощи нагревания прополиса, растворенного в этиловом спирте (1:3), в водяной бане, в четырех пробирках, нагретых до 40, 60, 80°Ц и, соответственно, 100°Ц. Нагревание продолжалось 3 минуты. Результаты приведены в таблице 5.

Часть III

В этой части работы определяли относительный эффект прополиса, по сравнению с антибиотиками. При сравнении пенициллина и прополиса использовали Staphylococcus aureus. Результат получился отрицательный, вероятно был тестирован устойчивый штамм. (Прополис создал ингибирующую зону, а пенициллин нет. Поэтому мы использовали Bacillus subtilis.

Опыт провели на пластинке большего размера, на которую в эндоагар ввели культуру микроорганизмов, культивированных в бульоне. На эндоагаре разместили 7 роликов спрополисом, растворенным в этиловом спирте (отношение 1:3) и пенициллин 16, 8, 4 е. Культуру держали в термостате при 37°Ц. Результаты приведены в таблице 6.

При установлении действия прополиса по сравнению с действием фунгицидина был использован как микроорганизм для тестирования Saccharomyces cerevisiae. Концентрация прополиса в этиловом спирте была 1:3; фунгицидин - 100 е, 50 е и 25 е. Результаты приведены в таблице 7.

Результаты и обсуждение

В работе мы хотели выявить антимикробное действие прополиса на некоторые виды микроорганизмов. Его антимикробное действие было доказано многими авторами. ЛИНДЕНФЕЛСЕР считает, что он оказывает общее бактериоетатическое и фунгистатическое воздействие, главным образом на грамлоложительные бактерии. Прополис не действовал ни на одну из двух испытанных дрожжевых культур.

Из проведенных опытов установлено, что прополис оказывал бактерицидное действие на большинство испытанных микроорганизмов, в особенности на грамлоложительные кокки Micrococcus lysodeicticus, Sarcina lutea, Staphylococcus aureus, на грамотрицательные бациллы - Bacillus subtilis, на грамлоложительные - Corynebacterium equi, а также на некоторые виды плесеней - Aspergillus ochraceus и дрожжей - Saccharomyces cerevisiae.

Разные концентрации прополиса о этиловом спирте не обнаружили существенного различия - до концентрации 1:10, имевшей самую низкую эффективность.

Не установлено разницы между действием прополиса, растворенного в этиловом спирте, и прополиса в растворе этилового спирта, разбавленного водой.

В серии опытов, проведенных для определения термостабильности прополиса, достоверных различий не отмечено. Можно предполагать что прополис является термостабильным веществом. Это его свойство было выявлено и КИВАЛКИНОЙ.

Относительный бактерицидный эффект прополиса соответствует бактерицидному эффекту 16 е. пенициллина и 25 е фунгицидина.

Следует отметить, что на результаты проведенных испытаний могло повлиять - скорее отрицательно - одно из свойств прополиса, а именно его растворимость в спирте, по сравнению с его возможной растворимостью в воде. Мы считаем, что несмотря на то, что испарения этилового спирта из роликов удалось относительно эффективно избежать (благодаря тому, что верхняя половина чашки Петри опиралась непосредственно на ролики), процесс испарения все же происходил вследствие диффузии раствора в твердой среде. Этим же можно объяснить отрицательный результат, полученный при испытании влияния этилового спирта на подопытные виды микроорганизмов. Были использованы максимально точные методы титрования, так как даже очень небольшая концентрация этилового спирта в жидкой культуре имеет бактерицидное действие.

Во время этих опытов возникло много вопросов, ответ на которые безусловно дадут новые исследования. Мы хотели бы ориентировать исследования по определению действия прополиса на самый широкий микробный спектр с целью определения ценности этого вещества с фармакологической точки зрения.