IV. ВОЗДЕЙСТВИЕ ПРОПОЛИСА НА РАЗЛИЧНЫЕ БИОЛОГИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ

КИВАЛКИНА В. П., БУДАРКОВА Э. Л. (СССР) - ВЛИЯНИЕ ПРОПОЛИСА НА ИММУНОГЕНЕЗ ПРИ ИММУНИЗАЦИИ СТОЛБНЯЧНЫМ АНАТОКСИНОМ

В последнее время прополис привлекает все большее внимание исследователей как неапецифичеоний стимулятор иммунологической реактивности. На кафедре микробиологии Казанского ветеринарного института было установлено благоприятное влияние прополиса на иммуногенез при совместном введении его с корпускулярным и некорпускулярным салмонеллезяыми антигенами (В. П. КИВАЛКИНА, В. А. БАЛАЛЫКИНА, 1969: А. И. БАЛАЛЫКИНА, 1968; И. И. ТЕТЕРЕВ, I960; В. П. КИВАЛКИНА, В. И. ПИОНТКОВСКИЙ, 1969, и др.).

В настоящей работе ставилась задача изучить действие прополиса на иммунологические показатели при совместном введении его оо столбнячным анатоксином. Были проведены две серии опытов.

В первой серии изучалось влияние прополиса на образование антитоксина и активность комплемента при гипериммунизации кроликов сорбированным и очищенным столбнячным анатоксином. Опыт поставили на 20 кроликах породы шиншилла весом 2-3 кг, в возрасте 6 месяцев. Животных разделили на 4 группы. В первой и третьей группах их шпериммунизировали оорбированным анатокоином, второй и четвертой - тем же анатоксинам в сочетании с прополисом. Было произведено 5 инъекций анатоксина с интервалами в 7 иней. Кроликам первой и второй групп вводили по 20, 40, 80, 120 и 160 ЕС. Кроликам третьей и четвертой групп первые три инъекции в тех же дозах, а последние - по 160 и 240 ЕС. Таким образом, кролики первой и второй групп получили меньшую суммарную дозу, чем третьей и четвертой. Прополис добавляли к анатоксину в виде спиртового экстракта из расчета 5 мг сухого вещества на 1 мл антигена.

Исследования сыворотки крови проводили до начала гйпериммунизации и в последующем еженедельно в течение двух месяцев. Количество антитоксина определяли методом реакции пассивной гемагглютинации и реакцией нейтрализации на белых мышах, активность комплемента - титрованием в гемолитической системе.

При гипериммунизации кроликов сорбированным столбнячным анатоксином появление антител в крови было отмечено через две недели после первой инъекции анатоксина. В дальнейшем уровень антитоксина постепенно повышался, достигая максимума у животных всех групп на 42 день. На 49 день содержание антитоксина в сыворотке крови резко снизилось и в дальнейшем ее повышалось, однако у животных третьей группы отмечалось незначительное увеличение титра антител.

Содержание антитоксина в сыворотке крови было выше у кроликов, иммунизированных меньшей суммарной дозой анатоксина с прополисом, чем у тех, которым вводили те. же дозы антигена без прополиса. На 42 день исследования количество антитоксина у кроликов второй группы, получивших меньшую суммарную дозу анатоксина с прополисом, составляло 208 АД, что было в 2,2 раза больше, чем у кроликов первой (контрольной) группы (96 АЕ).

У животных четвертой группы, иммунизированных большей дозой анатоксина с 1прополиюом, имело место незначительное увеличение уровня антитоксина по сравнению с его уровнем у кроликов, которым вводили те же дозы анатоксина, но без прополиса. Максимальное содержание антител в сыворотке крови кроликов этих групп было почти одинаковым - 121,6 и 120,8 АЕ.

Таким образом, увеличение суммарной дозы анатоксина без прополиса привело к повышенной ответной реакции организма. Прополис более выраженно стимулировал выработку антител только в сочетании с суммарно меньшей дозой анатоксина. При использовании суммарно большей дозы анатоксина добавление прополиса не вызывало такого эффекта.

Титр комплемента у животных, получавших анатоксин с прополисом, был выше, чем в контрольных группах на протяжении всего опыта. Более высокие титры комплемента отмечались в группе кроликов, иммунизированных суммарно меньшей дозой анатоксина с прополисом.

Полученные данные свидетельствуют о там, что гипериммунизация кроликов сорбированным столбнячным анатоксином с прополисом стимулирует яеслецифичеокие и специфические факторы иммунитета при применении суммарно меньшей дозы анатоксина.

Во второй серии опытов мы изучали влияние прополисного адъюваята на антитоксинообразование и защитные свойства сывороток, полученных в опытах гипериммунизации кроликов концентрированным очищенным столбнячным анатоксином. В опыте использовали 18 кроликов породы шиншилла в возрасте 6 месяцев, которые получили по 5 инъекций анатоксина с [интервалами в 7 дней. Кроликов контрольной группы гипериммунизиравали концентрированным очищенным столбнячным анатоксином в дозах 20, 40, 80, 120 и 160 ЕС. Животным опытной группы вводили то же количество анатоксина в те же сроки, но в сочетании с прополисом.

В опытах на 436 белых мышах весом 16-18 г изучали превентивные свойства сывороток крови кроликов. С этой целью сыворотки, полученные от контрольных и опытных животных, раздельно смешивали в равных объемах, при этом получали групповую сыворотку, которую вводили белым мышам под кожу в области спины в дозе 0,5 мл. На каждый срок использовалось 15-25 мышей. Через 24 часа после введения сыворотки мыши заражались путем инъекции определенного количества столбнячного токсина (от 1 до 8000 ДЛМ). Контролем служили мыши не привитые, но подвергнутые заражению. Клинические наблюдения за мышами вели 10 дней.

При гипериммунизации кроликов концентрированным анатоксином антитела появились в крови на 14 день после первой инъекции. При этом у кроликов, иммунизированных анатоксином с прополисам, их титр достоверно превышал контрольный уровень (таблица 1).

В дальнейшем содержание анатоксина в сыворотке крови постепенно возрастало, достигая максимума на 35 день исследования. В этот срок у кроликов опытной группы анатоксина было в два раза больше, чем у контрольных животных (р<0,01). Затем уровень антител снизился и к 63 дню составил 0,48 ± 0,27 АЕ в контрольной и 1,2 ± 0,19 АЕ в опытной группах. Таким образом, количество антитоксина в сыворотке крови кроликов, иммунизированных концентрированным анатоксином с прополисом, во все сроки исследования было достоверно выше, чем у животных, получавших анатоксин без прополиса. Исключение составил 28 день, когда разница в уровне антител оказалась недостоверной.

Превентивные свойства сывороток крови кроликов изучались в динамике. Если введение 30 ДЛМ столбнячного токсина мышам приводило к 100% гибели животных, привитых сывороткой крови кроликов контрольной группы в период появления в их крови антитоксина то введение этой же дозы токсина вызывало гибель только 40% мышей, которым вводили сыворотку крови опытных кроликов. На 21 день заражения мышей 200 ДЛМ столбнячного токсина вызывало 100% гибель мышей, привитых сывороткой крови контрольных животных, и гибель 15% мышей, привитых сывороткой опытных кроликов.

По мере накопления в крови кроликов антитоксина, защитные свойства сывороток возрастали. Причем сыворотки крови опытных животных предохраняли от гибели мышей в большей степени, чем сыворотки крови кроликов контрольной группы.

На 35 день исследования, когда отмечался наивысший уровень антитоксина, введение мышам, привитым сывороткой крови контрольных животных, 3000 ДЛМ столбнячного токсина привело к 100% гибели, а привитым сывороткой крови опытных кроликов, к появлению у 60% мышей второй степени и у 40% - первой степени столбняка.

В дальнейшем уровень антитоксина снизился, но защитные свойства сывороток крови возрастали. Так, на 42 день исследования, когда отмечалось снижение количества антитоксина, введение мышам, привитым сывороткой крови опытных животных, 8000 ДЛМ токсина привело к гибели только 28% мышей. Уровень антитоксина в последний срок исследования в обеих группах был ниже, чем исходный, однако в этот срок мыши выдержали в 10 раз большую дозу токсина по сравнению с начальным сроком.

Таким образом, исследования второй серии опытов показали, что по мере накопления антитоксина в крови, превентивные свойства сывороток возрастали. Однако снижение количества антител после достижения ими максимального уровня не привело к угасанию защитных свойств сывороток. Во все сроки исследования сыворотки крови животных, иммунизированных анатоксином с прополисом, предохраняли от гибели мышей в большей степени, чем у кроликов, получавших анатоксин без прополиса.

Полученные данные свидетельствуют, что прополис стимулирует неспецифические и специфические факторы иммунитета при иммунизации столбнячным анатоксином.

ЛИТЕРАТУРА

БАЛАЛЫКИНА А. И., 1968 - Мат. докл. научн. конф., посвящ. 95-летию Казанского вет. ин-та, с. 36-37.

КИВАЛКИНА В. П., БАЛАЛЫКИНА В. А., 1969 - Уч. зап-жи Казанского вет. ин-та, т. 102. с. 345.

КИВАЛКИНА В. П.. ПИОНТКОВСКИИ В. И., 1969 - Уч. зап. Казанского вет. нн-та, т. 105, с. 189.

ТЕТЕРЕВ И. И.. 1969 - Ветеринария, 8, с. 28.